基因?qū)雰x的工作原理及使用步驟

基因?qū)雰x，也叫電穿孔儀，廣泛應(yīng)用于各種動物、植物細胞和微生物的電穿孔，也可作細胞雜交、融合、基因?qū)氲难芯俊?/p>

基因?qū)雰x工作原理

細胞電轉(zhuǎn)染（電轉(zhuǎn)），也叫細胞電穿孔 (electroporation)，是把外源大分子物質(zhì)DNA、RNA、siRNA、蛋白質(zhì)等以及一些小分子導(dǎo)入細胞膜內(nèi)部的重要方法。

在瞬間強大電場的作用下，溶液中細胞的細胞膜具有了一定的通透性，帶電的外源物質(zhì)以類似電泳的方式進入細胞膜。由于細胞膜磷脂雙分子層的電阻很大，細胞外部電流場產(chǎn)生的細胞兩極電壓都被細胞膜承受，細胞質(zhì)內(nèi)分到的電壓可以忽略不計，細胞質(zhì)內(nèi)部幾乎沒有電流，因此也決定了正常范圍內(nèi)的電轉(zhuǎn)過程中細胞毒性很小。電場使DNA等物質(zhì)進入細胞膜后只能停止在細胞膜附近，隨后細胞本身的機制可以允許這些物質(zhì)到細胞核等處。

由于電轉(zhuǎn)技術(shù)依靠的是物理方法，細胞表面的分子特性對電轉(zhuǎn)影響比較小。相比化學轉(zhuǎn)染方法和病毒載體轉(zhuǎn)染方法，電轉(zhuǎn)可以用在所有的細胞種類上，而且容易定量控制。

 基因?qū)雰x和電轉(zhuǎn)儀

基因?qū)雰x是一個更廣義的概念，它指的是用于將外源基因?qū)肽繕松矬w中的任何工具或方法。這些工具和方法可以包括不同種類的轉(zhuǎn)染技術(shù)，如電轉(zhuǎn)染、化學轉(zhuǎn)染、微粒轟擊等。

 電轉(zhuǎn)儀是一種特定類型的基因?qū)雰x，它使用電脈沖來增加細胞膜的通透性，從而促使外源DNA進入細胞。電轉(zhuǎn)儀通常涉及一個電脈沖發(fā)生器和電極，通過施加適當?shù)碾妶鰲l件，使得細胞膜暫時變得滲透性增加，從而讓外源DNA進入細胞質(zhì)。

需要根據(jù)實際需求和實驗要求選擇合適的基因?qū)雰x和方法。在選擇和使用時，應(yīng)考慮到目標生物體的特性、實驗的目的和條件以及安全和倫理要求。

基因?qū)雰x的基本使用步驟

1. 準備工作：確保使用前進行必要的消毒和清潔操作。檢查導(dǎo)入儀的所有部件和配件是否完好無損。

2. 準備目標細胞：根據(jù)實驗要求，準備目標細胞的培養(yǎng)物。確保細胞處于最佳生長狀態(tài)，適合進行基因?qū)搿?/p>

3. 準備外源基因：準備需要導(dǎo)入的外源基因片段。這可以是通過PCR擴增得到的DNA片段、合成的基因序列、質(zhì)粒等。

4. 設(shè)置導(dǎo)入條件：根據(jù)實驗需求，調(diào)整導(dǎo)入儀的參數(shù)，如電壓、電極間距、脈沖數(shù)量和脈沖寬度等。這些參數(shù)會根據(jù)目標細胞的特性和基因?qū)敕秶牟煌兴兓?/p>

5. 轉(zhuǎn)染操作：將目標細胞與外源基因混合或處理，確保外源基因充分與目標細胞接觸。根據(jù)導(dǎo)入儀的類型，可以選擇合適的轉(zhuǎn)染方法，如電轉(zhuǎn)染、化學轉(zhuǎn)染或微粒轟擊。

6. 應(yīng)用導(dǎo)入條件：根據(jù)設(shè)置好的導(dǎo)入條件，施加電場、化學誘導(dǎo)劑或微粒轟擊等。確保導(dǎo)入過程以及轉(zhuǎn)染條件的控制時間恰當。

7. 恢復(fù)細胞：根據(jù)轉(zhuǎn)染后的細胞類型，選擇適當?shù)呐囵B(yǎng)基和條件，進行培養(yǎng)和恢復(fù)期，以使細胞適應(yīng)導(dǎo)入后的變化。

8. 檢測和分析：根據(jù)實驗?zāi)康?，可以使用合適的方法，如PCR、Western blot、流式細胞術(shù)等進行外源基因的表達和分析。

需要注意的是，使用基因?qū)雰x時應(yīng)嚴格遵守實驗操作指南和相關(guān)的生物安全規(guī)定。不同類型的基因?qū)雰x可能有不同的使用步驟和注意事項，請根據(jù)具體的設(shè)備說明書和實驗要求進行操作。